Sievers Eclipse细菌内毒素检测仪使用重组试剂进行检测

目的

美国药典第<86>章允许使用非动物来源的试剂进行细菌内毒素检测，包括使用重组级联试剂（rCR，Recombinant Cascade Reagent）和重组C因子试剂（rFC，Recombinant Factor C）。本文展示了Sievers®Eclipse细菌内毒素（BET，Bacterial Endotoxins Testing）检测仪与rCR试剂在化验各种药品时的适用性和相容性，为鲎试剂（LAL，Limulus Amoebocyte Lysate）细菌内毒素检测提供了高效、非动物来源的替代方法。

我们对7种已发布的市售产品进行了方法适用性和优化分析。我们用Sievers Eclipse细菌内毒素检测仪运行了一个批次的市售重组级联试剂（rCR），并对比了同一生产商的动态显色法鲎试剂。在本研究中测试的7种市售产品列于表1中。

表1：用Eclipse测试的产品

背景信息

Sievers Eclipse细菌内毒素检测仪采用动态方法来分析标准曲线和最多21个带阳性对照（PPC，Positive Product Controls）的样品。Sievers Eclipse微孔板预置来自参考标准内毒素（RSE，Reference Standard Endotoxin）的标准品和阳性对照（PPC），用户仅需使用1 mL的鲎试剂即可运行每次最多5点的标准曲线（范围：50 – 0.005 EU/mL）的化验。

市售的rCR试剂与显色法试剂类似，具有LAL级联结构。本研究旨在确定这种rCR试剂在进行现实生活样品测试时的表现是否确实与传统的动态显色法鲎试剂相似。我们用Sievers Eclipse对每种产品分别使用rCR试剂和动态显色法试剂进行测试。

样品制备和实验测试计划

我们通过测试不同稀释倍数的细菌内毒素检查用水（LRW，LAL Reagent Water）来对全部产品进行初步筛选，以确定哪种稀释度可以实现最佳PPC回收率和克服样品干扰。我们分析的稀释倍数包括1:1、1:10、1:20、1:50、1:100。表2是初步筛选出来的各种试剂类型的品名和稀释倍数。在测试产品时，我们对胰岛素、红霉素、氯化钾进行了多种稀释倍数的测试，以便在完成产品筛选后得到更多的结果并克服样品干扰。

表2：产品的稀释倍数

测试结果

测试结果总结如下。表3和表4是标准曲线的结果，表5-10是样品的结果。

表3：动态显色法鲎试剂的5点标准曲线结果：使用Sievers Eclipse测试

表4：重组级联试剂的5点标准曲线结果：使用Sievers Eclipse测试

表5：Sievers Eclipse测试的氯化钾液结果（每个板上有3或5份重复样品）

表6：Sievers Eclipse测试的红霉素液结果（每个板上有3或5份重复样品）

*一个重复样品有分孔

**所有3个重复样品中都有分孔

***一个重复样品的%CV > 15

表7：Sievers Eclipse测试的5%葡萄糖液结果（每个板上有3份重复样品）

表8：Sievers Eclipse测试的0.9%氯化钠液结果（每个板上有3份重复样品）

表9：Sievers Eclipse测试的乳酸林格氏液结果（每个板上有3份重复样品）

表10：Sievers Eclipse测试的人胰岛素注射液结果（连续编号的板上有3、5或6份重复样品）

*一个重复样品有分孔

表11：Sievers Eclipse测试的注射用水结果（每个板上有3份重复样品）

结论和建议

对于本研究中的大多数现实生活样品类型来说，Sievers Eclipse与市售的重组级联试剂有适用性和相容性。红霉素和胰岛素样品均有多个分孔，很可能是由于样品干扰。如果实验室考虑使用非动物来源的试剂进行符合USP <86>标准的细菌内毒素检测，则可以用Sievers Eclipse微孔板来优化rCR试剂。

为了便于以后分析，在比较rCR试剂和鲎试剂时，必须进行样品筛选以确定每种产品的最佳稀释倍数。当有更多批次的市售试剂可用时，也应对其进行测试以确认结果的准确度和可重复性。